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本试剂盒采用新型的裂解液，在经典的裂解液中添加了去除真菌多糖等杂质的成分。迅速裂解细胞和灭活内源、外源的RNA酶。使用吸附柱纯化，获得的RNA纯度更高，OD260/OD280比值一般为2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。

• RNA纯度高，OD260/OD280比值一般为2.0左右。
  
• 使用安全，操作过程中无需使用酚、氯仿等有毒试剂。
  
• 纯化柱吸附量大，稳定性好，重复性好。

• 自备试剂：无水乙醇、DEPC等。
  
• 按瓶身标签说明在GT Solution、NT Solution中加入相应量的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持GT Solution、NT Solution中的乙醇含量。（18mL GT Solution中应加入12mL无水乙醇，36mL GT Solution中应加入24mL无水乙醇；6mL NT Solution中应加入24mL无水乙醇，12mL NT Solution中应加入48mL无水乙醇。）
  
• 每次用前请检查Buffer Rlysis-FG是否有沉淀，如有沉淀请于37℃温浴后使用。

• 取450μL Buffer Rlysis-FG加入1.5mL RNase-free的离心管中备用。
  
• 取25～50mg新鲜真菌或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加到上述1.5mL离心管中，立即震荡混匀，室温放置5min。
  
  • 液氮研磨过程中要避免样品融化，使用的研钵与药匙等工具应事先用液氮预冷。研磨后的样品应迅速加入裂解液中震荡混匀，避免RNA降解。
    
  • 样品转入离心管时避免带入液态氮，因为液氮在封闭的离心管中迅速转变成气体可能引起离心管的爆裂，请注意安全。
    
  • 如果使用液体培养基培养的真菌样品，可短暂离心弃掉培养基后再用液氮进行研磨。
• 12000rpm 4℃离心3min，将上清移至1.5mL RNase-free的离心管中。
  
• 加入1/2体积无水乙醇，充分混匀。
  
  • 即使出现沉淀也不要离心。
• 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液全部加至吸附柱中，静置1min，室温12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • 如需彻底清除RNA当中的DNA，可以搭配RNase-Free DNA清除试剂盒(货号：GS2266)。
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL GT Solution，静置1min，室温10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • GT Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL NT Solution，静置1min，室温10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • NT Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，室温12000rpm离心2min。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
    
  • 将吸附柱打开盖子于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的乙醇，乙醇的残留会影响RNA的产量和后续的实验。
• 将吸附柱放入RNase-free的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30～50μL DEPC-treated ddH2O，静置2min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
  
  • RNA在-70℃保存，以防降解，或保存在RNA保存液(货号：GS2322)中。